文章目录

1 资料与方法

1.1 标本来源

1.2 膀胱癌细胞系

1.3 免疫组化检测

1.4 Western blot检测

1.5 TCGA数据库分析

1.6 慢病毒转染实验

1.7 CCK-8检测

1.8 细胞克隆实验

1.9 统计学分析

2 结果

2.1 免疫组化检测膀胱癌组织中免疫细胞的浸润情况

2.2 免疫组化检测膀胱癌组织中巨噬细胞的浸润情况

2.3 膀胱癌及癌旁组织全转录组测序结果

2.4 免疫组化检测CLDN10在膀胱癌组织的表达部位

2.5 Western blot检测CLDN10在膀胱癌组织中的表达

2.6 CLDN10促进膀胱癌细胞的生长和增殖

2.7 TCGA数据库中CLDN10与膀胱癌患者的预后分析

2.8 敲低CLDN10后膀胱癌细胞上皮-间质转化(epithelial-to-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白的表达

3 讨论

文章摘要:目的探讨膀胱癌微环境中M2巨噬细胞通过CLDN10信号通路对膀胱癌细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的调控作用及其机制。方法收集2020年3-9月重庆大学附属肿瘤医院收治的10例膀胱癌患者的新鲜癌组织及癌旁组织标本,免疫组化观测巨噬细胞表面标志物在膀胱癌组织中的表达;对癌和癌旁组织进行转录组测序,筛选出受巨噬细胞调控的潜在基因。采用CCK-8、细胞克隆、Western blot等方法观测CLDN10对膀胱癌细胞生长和增殖的作用。结果巨噬细胞特征性分子CD68和M2型巨噬细胞CD163分子在膀胱癌组织中表达增加。对基因测序结果分析后发现CLDN10基因在膀胱癌组织中表达最显著,对膀胱癌组织免疫组化结果行免疫评分后发现CLDN10的表达与巨噬细胞在膀胱癌组织中的浸润呈正相关。Western blot检测结果表明膀胱癌组织中CLDN10蛋白的表达水平较癌旁组织高（P<0.05）。敲低CLDN10的表达后,与对照组相比,生长曲线结果表明膀胱癌细胞生长能力下降,细胞克隆形成实验结果表明膀胱癌细胞形成细胞克隆数目降低（198.0±10.3 vs 145.0±8.4,P<0.05）,Western blot检测结果表明EMT相关指标蛋白snail、twist、vimentin的表达水平降低,而E-cadherin的表达水平升高（P<0.05）。结论巨噬细胞上调膀胱癌细胞CLDN10的表达促进膀胱癌细胞EMT的发生。

文章关键词:

论文DOI:10.16016/j.1000-5404.202106157

论文分类号:R737.14